第一百八十二章 殺手末路
此刻情況瞬間危機了起來，劍上附帶的洶湧魔力在不斷地蠶食著周圍的結界，黑衣人本來就是隨手為之的結界完全無法抵抗劍鋒的推進。雖然劍聖的手也同樣在飛速的潰爛，但是隻要一眨呀的功夫劍就能刺到，到時候一切都結束了…
至少在劍聖心中是這樣的…
“不好！小心這家夥有…”
沒等話音落下，遠處藏在重重樹葉中一位拿著觀測道具的一個殺手突然從樹叢間跌落，殺手中間的通訊戛然而止，劍聖的手出線了霎那的抖動。
就在這時黑衣人終於動手了，寬大袍子中的手臂猛然探出，隨意的將劍鋒直接捏在手裏。在手臂探出的同時，一套漆黑的鎧甲悄然附在其上，將整個手部連同手臂完全包裹在一起，黑褐色的金屬和劍鋒摩擦出一大片火花，就像是夜空中點燃了大片的煙火。
在劍聖驚訝的目光中，黑衣人手上燃起漆黑的火焰，似乎有著恐怖的吞噬能力將原本劍上附著的魔力清掃而空，甚至沿著劍身直接燒向持劍的手上。
劍聖臉上青筋暴起，似乎使用了是戰技，短時間增強自身的力量試圖將手中的劍掙脫對方的束縛，然而任憑劍刃和鎧甲間如何火花四射都無法動搖分毫。
“不錯嘛，六個殺手……劍聖、遊俠、法師再加上這位刺客…”
黑衣人話沒說完外麵的箭已經到了，隻不過卻沒有想象中的直接穿透馬車牆壁將裏麵的人刺穿，而是突然膨脹化為一道疾馳的身影。通過魔法師的變形術，將整個人化作箭再由遊俠射出去，整個計劃可以說天衣無縫就算是傳奇強者也絕對會深陷其中。
然而當刺客亮出匕首直奔黑衣人後心的時候，餘光卻不小心掃到了劍聖同伴的驚愕的表情，這也是他這輩子看見的最後一個畫麵。
一杆斬馬刀突然出線，就那麽橫在刺客身前，鋒利的黑色刀刃閃爍著令人生寒的異樣鋒芒，此刻刺客的速度卻沒留給他任何反應時間。噴湧的獻血依照著慣性向著前方湧去，卻繞開了黑色的袍子將劍聖淋了一身，而他卻似乎完全失去了思考，連手上被黑色火焰燒到都毫無自知。
就像是一個拍擊懸崖的小波浪，刺客的身體瞬間被分開無力的落下，而黑衣人卻還有餘力對近在咫尺的劍聖問道：“我猜應該還有一個刺客和他配合，然後交給戰士收尾，沒錯吧？”
“你…你你是傳奇？”
望著幾乎癱軟在地的劍聖，黑衣人有些失望的別過頭似乎在自言自語的說到：“現在的殺手組織都已經弱到這種程度了嗎？實在是有些無趣。”
漆黑的火焰無聲無息的向上蔓延，越過手腕，越過雙臂，點燃胸口，最後將整個人完全籠罩其中。一個超凡劍聖甚至連一個字也沒有再說出來，就那末化成了一地的殘渣隨風飛逝。
超凡已經是普通冒險者中的頂點，他們無不是一方負責人，就算是貴族也要客客氣氣的對待，但是此刻卻就這麽無聲無息的消失了，仿佛本來就沒有出現過一樣。
黑衣人站在樹林之間,兩個殺手的屍體已經倒在了地上,血液順著地麵向下流動隱入地下蹤跡消失無蹤.黑衣人的眉頭微微一皺,似乎發現了什麽,此時樹林裏靜的出奇,比剛開始進入時少了更多的生氣,仿佛這裏原本就沒有任何生物生活過一樣。
在這樣的環境之中，黑衣人的每一個動作都顯得極為嘈雜，在這樣的環境之中隻有他發出聲音顯得格外的刺耳。
“哦？沉默領域，沒想到你們的主子情報這麽厲害連這個都查出來了，倒是讓我刮目相看。”說著黑衣人的手微微抖動，空氣之中淡淡的黑色的魔力順著風蕩漾起來向外擴散，跨過樹與樹的間距想著遠方飄去。
如果
半空中向下看去能清晰的發現，黑衣人為圓心，一片黑暗在向外擴散轉瞬間講整個森林籠罩，空氣中仿佛有什麽東西在被打破了，無數細密的閃電在飛速迸發。
一道道細密的電弧在空中四處迸發，魔法竟然發出仿佛焦虎一樣的味道，空間中細密的裂縫不斷浮現。
淡淡的血腥氣息出現在森林四處，仿佛出現了一片血霧將整個森林籠罩，四處都有淡淡的血腥氣帶著肆虐的魔力四處遊走，將周圍的一切摧毀殆盡。
…：……
鈣離子信號。當接收到Ca2 信號後，SOS3可以與SOS2結合並激活SOS2。被激活的SOS2-SOS3複合物能勾保障植物免受逆境的威脅。
2 SnRK2的生化特性
2.1植物 SnRK2的活性及調控
可逆磷酸化是細胞代謝調控中重要的一部分。蛋白激酶的活化在ABA參與的信號通路中起著關鍵作用，特別是SnRK2，其在植物對滲透脅迫和ABA脅迫的響應中均有很大作用。從b-2細胞純化的ASK1激酶可以被蛋白磷酸酶2A激活，而堿性磷酸酶可以在鹽脅迫[7]下滅活水稻SnRK2成員SAPK1和SAPK2。OST1激酶活性可以激活ABA[8]。OST激酶抑製表明蛋白磷酸酶2 cABI1消極監管OST1 ABA信號通路的上遊[9]。有研究表明，大豆SPK1和SPK2激酶對高滲透壓的激活有重要作用。蠶豆AAPK的同源激酶能勾控製氣孔的開閉，進而抵禦環境缺水脅迫[10]。在mRNA水平上，SnRK2.6/OST1/SRK2E不受ABA調控，但在蛋白水平上，SnRK2.6可以被ABA和幹旱脅迫激活[11]。ABA的應答影響SnRK2.6突變體的氣孔開關，在mRNA水平上，小麥SnRK2分子PKABA1受到ABA調控[12-15]。RD22和RD29B是幹旱誘導的兩個基因，但在SRK2E突變體中都受到ABA的抑製。高滲透的逆境能激活SRK2RK2.8，使抗旱性極大提升。SRK2C基因在根中的表達非常高，而在葉和果仁中的表達相當低。
2.2 植物SnRK2的底物及靶蛋白
SnRK2磷酸化底物為組蛋白、酪蛋白和髓鞘堿性蛋白，而SnRK2磷酸化自身的[16]。研究表明，bZIP轉錄因子能勾由SnRK2激發活性。小麥TaAbF、水稻TRAB1都可作為底物被激活[17,18]。在水稻和擬南芥中，ABA響應轉錄因子可以作為底物磷酸化的SnRK2[19,20] ，通過在擬南芥原生質體細胞中過度表達擬南芥和水稻的SnRK2基因，發現5at-SNRK2s和3SAPKs可分別磷酸化AREB1b和TRAB1[21]。體外酶活性實驗表明，水稻OSRK1可以磷酸化底物OREB1、MBP和組蛋白。水稻OREB1是bZIP轉錄因子，與擬南芥中AREB/ABF /ABI5同源，OSRK1與OREB1的存在蛋白質相互作用。研究發現擬南芥中ABI1與SnRK2.6/SRK2E /OST1之間也存在相互作用，ABI1能勾調控與ABA相關的反應，且當ABI1與OST1結合時，能勾調控OST1的磷酸化位點。生物信息學分析煙草NtOSAK SnRK2成員的序列結構，發現SnRK2的保守序列非常類似於SNF1/AMPK激酶的底物，為蛋白質相互作用的預測提供基礎。Shin等人的實驗將研究範圍大大擴展到與SnRK2s成員相互作用的這些蛋白質上，包括腺苷酸激酶，醛、酮變位酶、磷酸異構酶RNA和60S核糖體蛋白核酸等。基於SnRK2的活性，信號通路主要分為兩個過程。首先是高滲透壓能勾誘發ABA的釋放，進而激活SnRK2，受到激活的SnRK2能勾磷酸化bZIP/ABRE/AREB家族，進而在轉錄和翻譯水平上引起這家族的活動。而與第一個信號相區別的是，第二信號傳遞過程是相對獨立在於內源性激素ABA的快速反應過程之中的。
3 對於SnRK蛋白激酶超家族前景的展望
正如我們所了解到的，各種生命體內都普遍存有SnRK1，但是僅有植物中特有SnRK2和SnRK3亞家族，因此推斷SnRK2、SnRK3亞家族可能是由SnRK1亞家族進化出來的，SnRK2、SnRK3亞家族主要參與植物對幹旱、鹽脅迫、溫度脅迫等非生物逆境的響應。SnRK1亞家族能調控植物碳氮代謝過程中的關鍵酶，感受植物體內能量變化[22]。目前在擬南芥、小麥、水稻、番茄、馬鈴薯、菠菜、豌豆、菜豆等植物體中已發現報道SnRK1激酶。在麵臨逆境脅迫時，植物能將一部分能量作為對逆境損失的補償，以保證其生存繁殖能力，植物的防禦體係與其繁殖能力是相互約束的，植物在適應環境時既要抵禦環境的威脅又要進行世代繁衍，因此在二者之間發生能量分配調節，使其更好地適應環境[25]。SnRK1亞家族可以作為植物體對環境適應的指示劑，通過SnRK1活性變化，監測植物在能量代謝和逆境應答過程的表現。
農業生產中，通過育種改良實現農作物在逆境條件下高產、穩產具有非常重要的意義。SnRK蛋白激酶與ABA 信號具有交叉重疊作用，使得SnRK蛋白激酶在植物抗逆過程中起到重要作用。深入了解SnRK基因家族的作用與機製，將有利於進一步提高農作物的抗逆能力，也為植物分子育種提供了新的前景。
迄如今，實現高產的育種方式以及使植物能勾更加抵擋外界不良環境的影響，這是我們人類所追求的目標，以及要達到的願望。而SnRK家族有助於我們完成所希望的東西，所以我們要深層次破解該家族的奧秘，努力讓其造福我們人類，讓人與生物和諧相處，這也為我們開拓了一個前所未有的前景。
第二章 黃瓜RK2.6基因的克隆及過表達載體構建
1 材料
1.1 供試植物
本試驗所采用的黃瓜品種為新泰密刺。
挑選飽滿的黃瓜種子投入常溫蒸餾水的燒杯中，將燒杯置於56℃恒溫水浴鍋中，不斷攪拌12 min，然後撈出黃瓜種子，再次投入常溫蒸